CAR-NK细胞杀伤实验

        自然杀伤NK细胞是人体先天免疫（innate immunity）的重要组成部分，该类细胞可以在不受MHC抗原呈递限制条件下识别并杀伤被细菌感染或转化为肿瘤的细胞，且NK细胞相对于T细胞具有更好的临床安全性。

        费洛斯的CAR-NK细胞疗法平台从早期靶点抗体序列的发现到CAR-NK的功能性研究，每一个阶段均具有成熟的研发体系。实验室配备流式细胞仪、多功能酶标仪等先进的仪器设备，并建立了多种分析检测实验平台，如：LDH法，DELFIA法，荧光霉素报告，Calcein AM染色法应对不同项目。

         DELFIA试剂盒检测靶向人mesothelin的CAR-NK杀伤效果实验流程

案例展示：anti-MSLN CAR NK细胞对卵巢癌细胞SK-OV-3杀伤检测

1. CAR载体构建：将含针对MSLN靶点单链抗体的二代经典CAR分子构建到慢病毒载体中，并包装得到MSLN-CAR慢病毒。其结构如图所示。

2. CAR-NK细胞获得：在293T中进行慢病毒包装，72h后收取含病毒上清并进行滴度检测，复苏我公司自主扩增的NK细胞并活化，病毒转化72h后流式检测CAR表达情况

3. 杀伤活性检测：使用DELFIA方法检测杀伤，在细胞培养96孔板中，加入每孔4000个靶细胞。在根据不同效靶比加入CAR-NK细胞共孵育4小时，取上清加入DELFIA检测底物中，使用时间分辨荧光酶标仪进行检测。

4. 计算杀伤活性：以下公式进行特异性杀伤计算，图例

（样品读数-靶细胞自释放读数）÷（最大释放读数-靶细胞自释放读数）×100%